高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A及B的含量

发表时间:2018/4/9   来源:《心理医生》2018年8期   作者:宋海东
[导读] 酸枣仁是一种鼠李科植物酸枣干燥成熟种子,有养心安血及镇静安神的作用,可以有效治疗失眠。

(榆中县马坡乡卫生院  甘肃兰州  730115)
  【摘要】目的:探究高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A及B的含量。方法:采用高效液相色谱法(HPLC),并用蒸发光散射检测器(ELSD),以Allspere ODS-2为色谱柱,将甲醇-水-冰醋酸作为流动相,对酸枣仁中的酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B含量予以测定。结果:通过对6个批次的商品药材进行测定分析,发现酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷回收率均较高。结论:将高效液相色谱法蒸发光散射检测器用于测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A及B的含量,不仅方法简便,而且重现性较好,便于对酸枣仁药材质量予以有效控制。
  【关键词】高效液相色谱法蒸发光散射检测器;测定;酸枣仁;酸枣仁皂苷A及B含量
  【中图分类号】R284                    【文献标识码】A                     【文章编号】1007-8231(2018)08-0311-02
  酸枣仁是一种鼠李科植物酸枣干燥成熟种子,有养心安血及镇静安神的作用,可以有效治疗失眠,是临床上常见的一类镇静催眠药物[1]。本文主要研究高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A及B的含量,并总结如下。
  1.试剂与仪器
  采用法国的SEDEX55型蒸发光散射检测及日本LC-10AD液相色谱仪,由杭州英谱科技开发有限公司的HS色谱数据工作站,对各地区的酸枣仁药材样品予以检测。酸枣仁皂苷A、B对照品主要由中国药品生物制品检定所提供,其纯度≥98%。试验用水均为高纯净水;甲醇主要为色谱纯;而其他试剂均由黑龙江省药学研究所提供。
  2.方法
  2.1 色谱测定条件
  色谱柱主要为Allspere ODS-2柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-水-冰醋酸,其比例为70:30:1,流速控制在1mL·min-1左右;填充剂使用的是十八烷基硅烷键合硅胶;预柱为Pellicular C18柱(7.5mm×4.6mm),其柱温在20℃ 左右;氮气压力为0.21MPa,而ELSD的气化室温度为75℃。
  2.2 溶液制备
  在对照品溶液制备中,需要精密称取酸枣仁皂苷A 4.092mg,酸枣仁皂苷B 1.492mg,利用5ml的甲醇溶解予以稀释,并在容量瓶中予以摇匀。
  在供试品溶液制备中,需要精密称取干燥细粉5g,放置于索氏提取器内,使用乙醚脱脂,在4h后,提取乙醚液,让药渣挥尽醚液。之后,使用甲醇回流提取约12h,并将甲醇液蒸干,将残渣用15mL的水予以溶解,并移到分液漏斗内,再用正丁醇予以萃取3次,每次在10mL左右,并注意合并正丁醇层,使用正丁醇饱和的氨水予以洗涤,每次10mL,洗涤2次,将正丁醇层予以蒸干,并用甲醇溶解残渣,定容到5mL。在使用前,要取部分溶液,并用 Millipo re溶剂过滤系统对后进样予以过滤。
  2.3 标准曲线制备
  将对照品溶液精密提取2μL,4μL,8μL,10μL,12μL,并结合色谱测定条件分别进样予以测定。测得的酸枣仁皂苷A、B峰面积,使用最小二乘法以进样量X(μg)来对峰面积对数(logY)予以线性回归分析。其回归方程为:
  (1)log Y=5.197×-5.264  r=0.9994,线性范围在1.6~9.6μg之间;
  (2)log Y=5.073×-5.187  r=0.9991,线性范围在0.6~3.6μg之间
  2.4 精密度检测
  将对照品溶液精密吸取5μL,依据含量测定项目下的色谱条件,予以连续进样6次,检测各次的峰面积,并计算出RSD。酸枣仁皂苷A RSD为1.0%,酸枣仁皂苷B RSD为2.7%。
  2.5 稳定性及重复性测试
  精密提取酸枣仁药材供试品溶液,按照含量测定项下的色谱条件,每2h测定一次,进样量在10μ左右,测定5次。经过测定后发现其24h内维持在稳定状态。
  采取同一批样品精密提取5份,按照上述检测方式进行,发现酸枣仁皂苷A含量为0.0802%,酸枣仁皂苷B含量为0.0346%,且RSD分别是3.4%及3.6%。
  2.6 回收率测试
  精密提取已测知含量的相关酸枣仁药材样品,每份2.5g,将其加入到2.5mL的对照品溶液中,以上述形式进行溶液的制备、测定,对回收率予以计算。
  2.7 样品检测
  将酸枣仁药材供试品溶液结合上述色谱条件予以测定,每次提取5~10μL,依据外标两点法对数方程予以计算,发现其含量测试精准性较高(具体如表)。且通过回收率计算,发现酸枣仁皂苷A的平均回收率在92.44%,而酸枣仁皂苷B的平均回收率为91.81%;RSD分别为3.8%及3.9%。在本次测定中,样品间的酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B含量具有一定的差异性,且生枣仁相比较炒枣仁含量更低。
  
  3.讨论
  酸枣仁具有安心养神的作用,是镇静剂中的一种类型。而而酸枣仁皂苷A、B是镇静催眠最主要的成分之一,通过对其含量进行测试,可以有效控制药物质量[2]。临床上对于酸枣仁皂苷A、B含量测定的方法较多,包括薄层扫描法、一阶导数光谱法等[3]。而高效液相色谱法是一种简单、快速的检测方法,可以对药物中的有效成分予以测定,且灵敏性、稳定性、重现性较强,可以为药物质量的测定提供可靠依据。
  但需要注意的是,在测定过程中,需要严格掌握测定条件,并对环境予以控制,以免测试结果受到影响[4]。在本测试中,各主产区的样品中,其酸枣仁皂苷A、B含量存在一定的差异,但其测试精准度均较高。
  【参考文献】
  [1]丁轲,张彤楠.快速溶剂萃取联合高效液相色谱法测定不同产地酸枣仁中皂苷A、B的含量[J].食品工业科技,2014,35(23):265-270.
  [2]姜辉,王斌.高效液相色谱法-蒸发光散射检测器同时测定肝乐颗粒中黄芪甲苷和芍药苷的含量[J].安徽中医药大学学报,2015,34(03):86-89.
  [3]毕福钧,林彤.酸枣仁提取物定性定量分析方法的研究[J].中药新药与临床药理,2015,26(03):365-369.
  [4]顾崇梅,王海涛.安神解郁胶囊质量控制方法的研究[J].甘肃中医学院学报,2014,31(05):28-31.

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