N种不同加样量对酶联免疫吸附测定法检测乙型肝炎病毒核心抗体结果的影响

发表时间:2018/5/7   来源:《航空军医》2018年4期   作者:王永喜
[导读] 对N中不同加样量对酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒核心抗体结果的影响进行研究。

(湖南省平江县长寿镇中心卫生院  414506)
摘要:目的 对N中不同加样量对酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒核心抗体结果的影响进行研究。方法 采集乙型肝炎病毒核心抗体HBcAb检测阳性与阴性标本各50例,采用6种不同加样量(即A、B、B1、B2、B3、B4)以酶联免疫吸附法对标本进行加样检测,其中,A为按照检测说明将检测血清按照1:30倍进行稀释处理后用于检测分析;B、B1……B4分别为直接进行10、20、30、40、50μl的血清加入以用于检测分析,对不同加样量的检测结果进行对比分析。结果 对比显示,不同加样量对乙型肝炎病毒核心抗体HBcAb阳性标本检测结果无明显影响,P>0.05;方法A与方法B加样量对乙型肝炎病毒核心抗体HBcAb阴性标本的检测结果无明显影响(P>0.05),其余加样量下乙型肝炎病毒核心抗体HBcAb阴性标本检测结果存在较大差异(P<0.05)。结论 不同加样量对酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒核心抗体结果存在一定影响,检测中可采用直接加入10μl血清方法进行检测,以减少加样环节对结果的影响。
关键词:不同加样量;酶联免疫吸附检测;乙型肝炎;病毒核心抗体

 
        酶联免疫吸附检测在进行乙型肝炎病毒核心抗体检验中,由于受到检测方法以及检测过程中加样量的影响,其检测结果与样本实际结果之间的符合率相对较低,对临床检查诊断存在着不利影响[1]。此外,乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)作为实现乙型肝炎流行病学调查与研究的有效指标,临床采用酶联免疫吸附法进行HBcAb检测中,主要采用将检测标本按照1:30倍稀释操作方法,但是由于该方法不仅操作复杂,并且容易受到人为因素影响,对检测结果造成误差影响[2]。为此,本文通过收集HBcAb阳性与阴性标本各50例,采用不同加样量对样本进行检测分析,以为有关研究及临床检测提供参考。
        1材料和方法
        1.1样本来源
        选取经临床检验确诊的50例乙型肝炎HBcAb阳性标本,同时选取经健康体检排除存在感染性疾病的50例乙型肝炎HBcAb阴性标本,作为本次研究分析样本。
        1.2仪器与试剂
        本次检验分析使用仪器为RT6100C酶标仪(深圳雷杜公司)、UVW2000洗板机(华科瑞公司)以及HBcAb检测试剂盒(上海科华实业有限公司)。
        1.3方法
        采用6种不同加样量(即A、B、B1、B2、B3、B4)以酶联免疫吸附法对标本进行加样检测,其中,A为按照酶联免疫吸附检测中说明书标注方法将血清标本按照1:30倍进行稀释处理后用于检测分析;B、B1……B4按照分别进行10、20、30、40、50μl的血清直接加入后检验方式,每种加样检测中均对阴性、阳性标本进行对照检测与分析,检测操作严格按照说明操作,做好检测的室内质控等各种对检测质量可能存在影响的环节控制与管理,确保检测结果准确、真实。
        1.4统计学分析
        采用统计学软件SPSS16.0进行数据分析处理,其中,计数资料采用X2检验,以百分比表示,计量资料采用t检验,以均数±标准差表示,P<0.05表示差异突出,具有统计学意义。
        2结果
        统计分析显示,6种不同加样量下,50例阳性标本的检测结果与样本临床确认结果基本一致,无明显差异,P>0.05,无统计学意义。而50例阴性标本中,加样A与加样B方式下的检测结果与临床确认结果一致,无明显差异,P>0.05;其余加样量下检测结果与A相比存在明显差异,P<0.05,具有统计学意义。如下表1所示,为不同加样量下50例乙型肝炎HBcAb阴性标本检测结果对比。
 

注:*与A比P<0.05
        3讨论
        临床中,酶联免疫吸附法是进行乙型肝炎病毒核心抗体检测常用的一种方法,值得注意的是,由于不同企业生产的酶联免疫检验试剂盒,其质量特征各不相同,其对临床酶联免疫吸附检测乙型肝炎病毒核心抗体结果产生的影响也不相同。其中,不同加样量是影响美联免疫吸附检测乙型肝炎病毒核心抗体结果的重要因素之一。由于临床检验过程中,除加样外,孵育、洗板以及比色等操作环节都可能对检测结果存在一定的影响,导致误差发生,其中,酶联免疫试剂盒生产中不公平竞争因素是酶联免疫吸附检测中最难克服的影响因素。此外,临床检验中,为减少室内质控环节对检测的影响,普遍以室内质控品加强检测过程中的质量控制,也就是通过在标本加样完成后加入质控品,这种质控方式受到加样时间的影响相对比较小,但是存在质控品浓度较高情况,一般为2ncu/ml,临床检验中需要结合实际情况进行选择应用[3]。
        其次,乙型肝炎病毒核心抗体是一种与其他抗体指标不同、能够用于乙型肝炎流行病学调查的重要指标,在人体血清中具有普遍存在特征,并且根据病毒感染情况不同表现为浓度水平不同。临床在进行乙型肝炎病毒核心抗体检测中,主要是通过将检测样本进行稀释后检测方式,这种被稀释的抗体因子,在检验分析中仍能够与包被HBcAg进行率先结合,提高样本检测的阳性率。临床有研究显示,通过对100例抗-HBc单项阳性的标本进行复检,结果显示有73%的样本检测结果转为阴性;此外,还有研究显示,对抗-HBc检测样本进行加样后室温放置不同时间后,使用酶联试剂进行检验,在2至5min内存在约7.4%至10.6%的样本假阳性结果[4]。由此可见,加样方式对酶联免疫吸附检测乙型肝炎病毒核心抗体结果存在一定影响。
        上文中,通过对50例乙型肝炎HBcAb阳性与50例乙型肝炎HBcAb阴性样本进行不同加样量下检验分析显示,不同加样量对HBcAb阳性标本检测结果无明显影响,P>0.05;而HBcAb阴性样本中,按照酶免试剂检测说明方法进行1:30倍样本稀释后检测以及直接加入10μl血清检测,其结果无明显差异,P>0.05;其余按照直接加入20、30、40、50μl血清进行检验的阴性样本,其检测结果与A相比存在明显差异,P<0.05,具有统计学意义。由此可见,血清加入量过多会对乙型肝炎HBcAb阴性样本检测结果产生影响,出现假阳性可能。这主要是由于,过多量的血清加入,导致其在检验中与包被HBcAg产生非特异性结合,在添加酶联试剂后对其结合造成影响,出现吸光度降低,使检测结果出现假阳性。
        总之,不同加样量对酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒核心抗体结果存在一定影响,检测中可采用直接加入10μl血清方法进行检测,以减少加样环节对结果的影响。
参考文献
[1]董春兰.化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒标志物的临床比较[J].中国医药指南,2016,14(19):44-45.
[2]王娜.酶联免疫吸附试验和时间分辨荧光免疫技术在乙型肝炎病毒血清标志物检测中的临床价值[J].中外医学研究,2016,14(15):62-63.
[3]周双艳,赵克斌,杨泽华.化学发光微粒子免疫分析法与酶联免疫吸附法检测血清乙型肝炎表面抗体的比对[J].中国药物与临床,2016,16(05):753-755.
[4]安静娜,李冬冬,陈其霞,等.电化学发光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒血清标志物的结果分析[J].中国输血杂志,2015,28(04):374-376.
 

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