论免疫检测技术在食品检验中的应用

发表时间:2018/6/9   来源:《中国蒙医药》2018年第3期   作者:郎静
[导读] 免疫分析技术具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、检测成本低、安全可靠等优点,己成为现代生命科学的重要研究手段

郎静
黑龙江首食测试科技有限公司  哈尔滨  150000
           【摘  要】免疫分析技术具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、检测成本低、安全可靠等优点,己成为现代生命科学的重要研究手段,在食品安全检测中有着良好的应用前景。本文主要论述了近年来出现的免疫分析新方法,简单介绍了它们的特点及在食品安全检测中的应用。
           【关键词】免疫分析;食品安全;优化;应用。


           前言:随着全球食品安全问题的关注程度越来越高,食品中污染物和危害物的检测越来越重要,这就需要快速、准确、灵敏、能进行多组分析的检测技术。免疫检测技术是近几年发展起来的新技术,是将免疫反应和现代测试手段相结合而建立的超微量测定技术。免疫分析法就是基于抗原、抗体的特异性识别和结合反应为基础的分析方法,具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、分析容量大、检测成本低、安全可靠等优点,己成为21世纪最具竞争性和挑战性的检测分析技术,应用到食品安全检测领域的免疫分析方法除了传统的放射免疫分析、酶联免疫分析、荧光免疫分析、发光免疫分析外,还出现了分子分析方法,多元化免疫检测技术必将提高食品检验效率及准确性。
           1.免疫检测技术在食品检验中的应用现状
           近几年,中国政府开始高度重视食品安全和药物残留,先后颁布了许多关于食品安全的法律,严禁在动物源食品中使用某些兽药,又详细规定了其他药物的合理使用方法,并据此规定了兽药的检验要求。除此之外,食品中的药物问题还对我国畜禽、水产品、农副产品的外贸出口造成严重影响。所有这些都为与食品相关的检验试剂和手段的产业化提供了机会。现今,在畜禽水产养殖业中,抗生素使用非常普遍。除氯霉素外,还有硝基呋喃,二甲基咪唑,青霉素,磺胺药,喹诺酮,四环素等等。这些药物在动物源食品中残留,严重威胁人们的健康。免疫检测技术将免疫反应和现代测试手段相结合而建立的超微量测定技术,以此加强食品检疫安全。
           2.食品检验中存在的问题
           目前,食品检验新技术发展比较快,也得到比较广泛的应用,但仍然存在许多问题有待于进一步解决。例如:在水溶液或极性溶剂中进行分子印迹和识别仍是一大难题,分子印迹聚合物中残余的印迹分子难以除尽会影响分析结果;FIIA—次只能分析一个试样,很难满足环境和食品检测分析中大批量试样分析的需要。免疫-PCR虽然还处于实验阶段,但它检测的灵敏度很具有吸引力。寻找一种来源方便、高效、专一的连接分子,将会是此研究方向的一个热点。使用更简单实用的新型固定化技术和性能更优越的载体材料,促进固定化生物活性单元获得更多的实际应用,这是生物传感器今后的研究热点和难点。多组分分析物免疫分析中的几种标记物的测定条件必须相互妥协,测定的灵敏度和组分数均要受到限制,同时多组分定位的包被和检测也将是该领域的研究难点。另外,从目前的研究看,这几种新技术主要应用在农药残留中,特别是三嗪类农药的检测,对细菌、毒素、兽药残留和重金属残留等其他污染物的研究比较少,这些都将成为今后的研究热点。



           3.免疫检测新技术的应用
           3.1免疫-PCR技术
           聚合酶链式反应技术1985年的问世,引起分子生物学的一场革命。1991年首次将PCR技术引入免疫反应,将抗原-抗体反应的高度特异性与PCR技术的高灵敏度、高自动化、操作简便等特点结合起来,形成了免疫-PCR技术,开创了免疫检测技术的新时代。免疫-PCR将抗原-抗体反应与PCR 强大的扩增能力结合在一起,使免疫分析的灵敏度进一步提高,是目前为止最为敏感的检测方法,理论上可以检测到一个抗原分子的存在。免疫-PCR的基本原理与酶联免疫吸附分析基本相似,所不同的是用一段可扩增的DNA分子代替ELISA中的酶来放大检出信号。这种新技术具有以下优点:特异性强,形成的免疫-PCR是建立在酶联免疫吸附试验基础上,所以具有抗原-抗体反应的特异性;敏感性高,免疫-PCR结合了PCR惊人的扩增能力,所以其敏感性比较高;操作简便,不需特殊设备,一般实验室只要具有酶联免疫技术和最普通的PCR技术就可以完成。由于具有高特异性和高灵敏度,免疫-PCR技术有着广泛的应用前景,如检测鸡肉中的弯曲菌属、鼠伤寒杆菌及乳酪中的李斯特菌属等,也可以用这种方法来检测极微量的抗原,如毒素、毒物、有毒化学物质等。例如:有报道将免疫-PCR用于大肠杆菌的检测,取得了不错的效果。采用传统方法与免疫-PCR技术对生禽肉中沙门氏菌进行检测发现,采用传统方法检出16%的样品被沙门氏菌污染,而运用免疫-PCR技术则检出19%的污染样品,可见免疫-PCR技术的敏感性更强。
           3.2多组分分析物免疫分析
           多组分分析物免疫是指在同一份样品中,同时测定两种或两种以上的相关分析物的免疫分析技术。这种技术的应用对需要检测多种物质的综合测定提供了重要信息,有利于环境、食物的多种农药残留和植物中多种农药接触检测,特别是对混配农药接触分析以及对其联合作用及体内代谢动力学的探讨和研究具有重要意义。由于抗体的特异性,一种抗体一般只能检测一种抗原,当进行多组分分析时,就得同时使用多种抗体。多组分免疫分析技术现在有两种设计方式多探针标记法,它基于用不同标记物对多种抗原或半抗原标记,用竞争法测定各物质的量;多组分定位包被空间分辨分析法即利用空间的不同位置标记,同种标记物来测定,在不同的固相体系或同一固相载体上的不同反应区带上,包被不同抗体,用于固相免疫同时测定。目前,该法已取得了相当成功的应用成果。评价了用多组分分析物ELISA分析法分析三嗪类农药,制备了5种三嗪特异性单克隆抗体来检验莠去津、西玛津和氰草津的反应性和灵敏性,其中三种抗体表现出相同的反应方式,而另两种各表现独自的反应方式,然后选3种反应方式各不相同的抗体,同时进行莠去津、西玛津和氰草津及总三嗪类的含量检测,并把这种免疫分析结果与高效液相色谱分析结果进行对比分析,发现莠去津、西玛津和氰草津和总三嗪量其各自相关系数分别为0.94、0.90、0.92和0.85,在实验中取得了较好的检验效果。
           3.3合成有效的完全抗原
           几乎所有的兽药和农药都是小分子有机化合物,有抗原性但不具有免疫原性,称之为半抗原。因此,为了制备抗体,首先必须合成相应的完全抗原。完全抗原的合成有多种方法可供选择,取决于半抗原的化学结构和化学性质。最常用的方法有6种:重氮化法,缩合法,NHS酯法,NHS Ester法,戊二醛法,碳二亚胺法。这六种偶联法均可用于完全抗原的制备。高质量的抗体取决于高质量的抗原,而高质量的抗原则取决于诸多因素,包括:选用的载体蛋白偶联试剂的种类和长度,采用的偶联方法,偶联反应的条件等等。可以说,技术含量最高的部分就在于通过大量实验摸索,寻找出一个制备高质量抗原的路线和方法。
           结语
           总而言之,我国免疫检测技术在食品检验中的应用仍在蓬勃发展过程中,工艺流程和生产设备不断的革新。只有积极的采取各种先进的工艺,改良和引进先进的设备,同时结合生产实际,制定最有效的工艺流程方案,采取最科学的方法,才能够让免疫检测技术在食品检验中起到更好的作用。

           参考文献:
           [1]李良铸.李晔编.最新生化药物制备技术[J].北京:中国医 药科技出版社,2002.76-78.

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